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          毒素的检真菌验四
          2025-05-14 02:35:44

          4、真菌分析步骤

          (1)试样的毒素的检制备

          ①谷物:在粉碎机中粉碎并通过庐2mm圆孔筛。

          ②啤酒:使用前先置于0~4℃冰箱冷藏1h,真菌启盖,毒素的检倒入锥形瓶中在振荡器上振摇消泡。真菌

          (2)免疫亲和柱色谱净化高效液相色谱法(快速确证方法)

          ①提取

          a.谷物(小麦、毒素的检大麦、真菌玉米):准确称取试样50.0g(准确到0.1g)于均质器配置的毒素的检搅拌杯中,加入5.0g氯化钠,真菌加入100mL甲醇+水(8+2)(V1)。毒素的检将搅拌杯置于均质器上,真菌于20000r/min高速搅拌提取1min。毒素的检提取液经槽纹折叠滤纸过滤于干净的真菌烧杯中。准确移取10.0mL(V2)滤液并加入40.0mL水(V2)稀释,毒素的检混合均匀,真菌经玻璃纤维滤纸直接过滤入10mL注射器。

          b.酒类(啤酒、葡萄酒、黄酒):准确移取试样10mL于100mL烧杯中,加入10mLl%聚乙二醇+5%碳酸氢钠溶液(V1总量应为20mL),用玻璃棒搅拌均匀。准确移取10.0mL(V2)经玻璃纤维滤纸直接过滤入10mL注射器。

          ②净化

          a.谷物:将免疫亲和柱连接于10mL玻璃注射器下。准确移取10.OmL(V4)样品提取液于玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器相连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过免疫亲和柱。以10mL淋洗溶液、10mL水先后淋洗免疫亲和柱,弃去全部流出液,并使2~3mL空气通过免疫亲和柱。准确加入1.OmL(V)甲醇洗脱,流速为1~2mL/min。收集全部洗脱液于玻璃试管中。

          b.酒类:将免疫亲和柱连接于10mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL(V4)样品提取液于玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器相连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过免疫亲和柱。以5mL淋洗溶液、5mL水先后淋洗免疫亲和柱,弃去全部流出液,并使2~3mL空气通过免疫亲和柱。准确加入1.0mL(V)甲醇洗脱,流速为1~2mL/min。收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。

          ③测定

          a.高效液相色谱条件激发波长360nm;发射波长420nm。

          色谱柱:C18柱(柱长150mm,内径3.0mm,填料直径5μm)。

          流动相:乙腈-0.012mol/L磷酸钠溶液。进样量:20μL。

          b.操作:用微量注射器吸取20μL赭曲霉毒素A标准工作溶液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰高或峰面积),得到赭曲霉毒素A标准溶液高效液相色谱图。

          用微量注射器吸取20μL样品洗脱液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰高或峰面积)。经过与赭曲霉毒素A标准溶液谱图比较响应值得到试样中赭曲霉毒素A的浓度(c)。

          ④空白试验用水代替试样,按上述步骤做空白试验。

          ⑤结果计算:样品中赭曲霉毒素A的含量(X)以μg/kg表示,按式1计算:

          其中:

          式中:X1——样品中赭曲霉毒素A的含量,μg/kg;

          c1——试样中赭曲霉毒素A的含量,μg/L;

          co——空白试验中赭曲霉毒素A的含量,μg/L;

          V——最终甲醇洗脱液体积,mL;

          W——最终净化洗脱液所含的试样质量,g;

          m——试样称取的质量的数值,g;

          V1——样品和提取液总体积,mL;

          V2——稀释用样品滤液体积,mL;

          V3——稀释液体积,mL;

          V4——通过免疫亲和柱的样品提取液体积,mL。

          ⑥测定低限:免疫亲和柱色谱净化高效液相色谱法测定谷物、酒类、藤蔓水果干、香辛料的低限均为1μg/kg(μg/L)。

          (3)免疫亲和柱色谱净化荧光光度法(快速筛选方法)

          ①提取

          a.谷物(小麦、大麦、玉米)同(2)①a。

          b.酒类(啤酒、白葡萄酒、黄酒):准确移取试样50mL于均质器配置的搅拌杯中,加入50mL 1%碳酸氢钠溶液(V1总量应为100mL),以20000r/min高速搅拌提取1min,静置。准确移取10.0mL(V2)并加入40.0mL纯水(V3)稀释,用玻璃纤维滤纸直接过滤入10mL注射器。

          ②净化

          色谷物同(2)②a操作至“以10mL淋洗溶液、10mL水先后淋洗免疫亲和柱,弃去全部流出液,并使2~3mL空气通过免疫亲和柱”为止。准确加入1.5mL(V)洗脱溶液洗脱,流速为1~2mL/min。收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。

          b.酒类(啤酒、白葡萄酒、黄酒):将免疫亲和柱连接于10mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL( V4)样品提取液于玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器相连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过免疫亲和柱。以10mL淋洗溶液、10mL水先后淋洗免疫亲和柱,弃去全部流出液,并使2~3mL空气通过免疫亲和柱。准确加入1.5mL(V)洗脱溶液洗脱,流速为1~2mL/min。收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。

          ③测定:荧光光度计仪器条件激发波长360nm,发射波长440nm。

          荧光光度计校准以0.05moL/L硫酸溶液为空白,调节荧光光度计的读数值为0;以荧光光度计校准溶液调节荧光光度计的读数值为36。

          样液测定将洗脱液立即置于荧光光度计中读取样液中赭曲霉毒素A的浓度(c)。

          ④空白试验用水代替试样,按上述步骤做空白试验。

          ⑤结果计算:                    

          ⑥测定低限:免疫亲和柱色谱净化高效液相色谱法测定谷物、酒类、藤蔓水果干、香辛料的低限均为1μg/kg(μg/L)。

          5、结果

          (1)色谱图:图为赭曲霉毒素A标准溶液的高效液相色谱图。

          (2)浓度与响应值的线性关系 赭曲霉毒素A系列标准溶液的液相色谱浓度与响应值的线性关系

          线性方程:y=3.185021x-0.075619(R=0.9999)

          参考资料:食品检测技术,版权归原作者所有,如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系。

          相关链接:免疫亲和柱赭曲霉毒素A碳酸氢钠

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              3)针对具体风水等问题进行求助或咨询;
              4)问自己或他人的八字、六爻、星盘、手相、面相、五行缺失,包括通过占卜方法问婚姻、前程、运势,东西宠物丢了能不能找回、取名改名等;


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              1)以各种夸张、猎奇、不合常理的表现手法等行为来诱导用户;
              2)内容与标题之间存在严重不实或者原意扭曲;
              3)使用夸张标题,内容与标题严重不符的。


          8.「饭圈」乱象行为,主要表现为:
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              3)鼓动「饭圈」粉丝攀比炫富、奢靡享乐等行为
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